南京沃博生物科技有限公司

研究丨DSM Prionex®蛋白稳定剂与BSA性能大PK

时间:2023-12-18阅读:92

1、成分:高纯度猪真皮胶原蛋白多肽溶液,不含防腐剂、添加剂和稳定剂

2、制备工艺:猪皮胶原蛋白在弱酸条件下经部分水解后,在145°C下经1小时热处理后,后通过0.2μm的膜进行无菌过滤

3、特性:无酶活性也无已知的酶抑制剂活性,不含免疫反应蛋白,不含脂质、多糖或核酸

4、溶解性:易溶于水、稀释的电解质溶液、甘油、DMSO、浓度低于75%的乙醇、以及低于20%饱和度的硫酸铵溶液

5、热稳定性:不会凝胶化且具有热稳定性,在加热灭菌过程中不会沉淀(在121°C下20分钟)


保持蛋白质稳定的思路

蛋白质是免疫诊断产品开发的基础,不管是作为原料的抗原抗体、或是大部分的待检标志物,都是蛋白质。在体外诊断试剂研发中,试剂稳定性是经常困扰研发人员的一个大问题。试剂稳定性的问题很大程度可以归结为如何在体外环境下维持蛋白质天然结构防止蛋白质活性位点失活的问题另外保证校准质控品的稳定,也是获得准确测试结果的保证。我们通常使用以下方法来稳定蛋白质:

1、抑菌剂、防腐剂

2、pH值/离子强度

3、蛋白酶抑制剂

4、利用静电作用防止聚集,如添加表面活性剂

5、添加抗氧化剂

6、加入氨基酸,调节溶解度

7、添加惰性化合物,如BSA、Blockmaster®、Prionex®

Prionex®的应用

※ 蛋白质/酶的稳定剂

※ 蛋白质冻干/热处理的保护剂

※ ELISA等免疫检测的封闭剂

应用实例



储存实验


在含2NIH-U/mlningxuemei的溶液中加分别入Prionex®和BSA,终浓度为1.0%,将溶液保持在37℃。通过检测凝血时间测定ningxuemei活性,时间延长表示ningxuemei失活。

Prionex®能更有效地提高ningxuemei的储存稳定性可用于延长蛋白质制剂的保质期



热稳定性


在含有3BU/mlningxuemei样巴曲酶的溶液中分别加入Prionex和BSA,终浓度为1.0%,并在沸水浴中加热。通过检测凝血时间测定巴曲酶活性,时间延长表示巴曲酶失活。

Prionex®对巴曲酶的酶活性有非常显著的稳定作用



吸附效应


高度稀释的蛋白质溶液在处理过程中,通常因吸附效应(比如被吸附在容器壁、膜、助滤剂或色谱介质上)导致显著的活性损失。
向含有20U/mlyidanbaimei和1.0%稳定剂的溶液中加入10%的玻璃粉末。在室温下摇动后(160rpm),使用显色底物在405nm处比色测定yidanbaimei活性。

在防止蛋白质吸附的应用上Prionex®与BSA有同等性能



冷冻干燥


冷冻干燥是长时间保存不稳定蛋白质的标准方法,然而冷冻干燥过程非常复杂。如果方法和配方未充分优化,会经常发生物理和化学变化,导致蛋白变性。 
将含有10μLNIH-U/mlningxuemei和10%稳定剂的溶液冻干。复溶后,通过检测凝血时间测定ningxuemei活性,时间延长表示ningxuemei失活。

在使用Prionex®冷冻干燥的样品中未观察到酶活性的降低,而含有BSA的样品的活性有略微降低(参见上图)。Prionex®不仅是一种有效的冻干保护剂还可产生坚固易于溶解的冻干饼


产品货号



除了上述应用实例外,Prionex®还被多家国际ZHIMING校准质控品供应商大规模采用,并已经在磁珠抗体偶联物保存液、胶乳抗体偶联物保存液、生化试剂等应用中得到验证



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